Rishikimi i Vitit nga MDJ: "Genotipizimi i Thellë" - Çfarë mund të na mësojë sekuencimi i gjeneratës së tretë

Titulli i artikullit është, Eksplorimi i Sëmundjeve Neurogjenerative Duke Përdorur Sekuencimin me Lexim të Gjatë dhe Teknologjitë e Hartimit Optik të Gjenomit. Urime të dyve për këtë nominim të rëndësishëm. Dr. Cogan, na tregoni pak për përvojën tuaj dhe çfarë ju frymëzoi të shkruani këtë punim.

Dr. Guillaume Cogan: Përshëndetje. Faleminderit që na ftuat. Unë jam gjenetiste mjekësore dhe tani [00:01:00] po bëj doktoraturën në Institutin e Trurit të Parisit. Dhe patëm një projekt së bashku nga Instituti i Trurit të Parisit me Institutet Kombëtare të Shëndetit, me kolegët tanë që janë gjithashtu bashkautorë të punimit, Kensuke Daida, Cornelis Blauwendraat dhe Kimberly Billingsley.

Pra, në thelb kishim një grup rastesh të pazgjidhura të PD-së, të cilat kishin sekuencim të ekzomit në gjak. Kishim raste familjare dhe gjithashtu raste me fillim të hershëm dhe donim të përpiqeshim të identifikonim diçka si mutacioni që po shkakton sëmundjen. Dhe për ta bërë këtë, përdorëm sekuencim me lexim të gjatë. Do të hyj në detajet e kësaj në të ardhmen. Dhe kishim një rast interesant, donim ta raportonim këtë për çrregullimet e lëvizjes, kështu që e bëmë. Redaktori na kërkoi të bënim një rishikim në lidhje me sekuencimin me lexim të gjatë, por edhe hartëzimin optik të gjenomit për të marrë një rishikim të teknologjive të reja gjenetike që mund të përdorim në çrregullimet neurodegjenerative.

Dr. Sarah Camargos: Shumë bukur. Mendoj se gjenetika, ndonjëherë mund të duket si një temë sfiduese për neurologët [00:02:00]. Pra, le të bëjmë një hap prapa dhe të fillojmë me bazat. Do të flasim për llojin e varianteve që shkaktojnë sëmundje neurodegjenerative, variantet me një nukleotid të vetëm, variantet strukturore dhe zgjerimet e përsëritura.

A mund të shpjegoni këto teknika të përdorura për të studiuar këto lloj variantesh?

Prof. Alexis Brice: Po, unë mund të filloj dhe Guillaume do ta përfundojë. Mendoj se ajo që është me të vërtetë e rëndësishme është fakti që sekuencimi me lexim të gjatë do të thotë që mund të analizosh fragmente të gjata të ADN-së në vend që të lexosh diçka si 150 deri në 300 çifte bazash për secilin fragment, ke diçka si dhjetëra kilogramë baza, dhe kjo ndryshon shumë.

Sepse mund të zbuloni shumë nga rirregullimet [00:03:00], të cilat nuk zbulohen nga teknikat e zakonshme. Dhe kjo do të thotë, për shembull, kur ka një inversion në gjen, mund të shihni pikat e kryqëzimit. Mund t'i renditni ato. Mund të zbuloni më lehtë dublikimet ose fshirjet.

Dhe kjo është një temë edhe për shumë sëmundje neurodegjenerative. Si dhe zgjerimet e përsëritura. Ato të voglat mund të kapen me teknikat klasike, por sapo të kalojnë madhësinë e 300 çifteve bazë, nuk munden. Pra, me sekuencimin me lexim të gjatë. Përsëri, mund të dalloni këtë lloj variantesh.

Pra, këto janë aspektet më të rëndësishme. Por ka edhe të tjera. Për shembull, mund të dalloni individë që kanë dy variante në një gjen. Mund të thoni nëse janë në cis apo në trans. Dhe për sëmundjen recesive, [00:04:00] ata duhet të jenë në trans nëse doni të siguroheni që janë përgjegjës për sëmundjen.

Gjithashtu mund të keni zbatime për gjenet dhe pseudogjenet kur ato janë shumë homologe. Sekuencimi me lexim të gjatë lejon përsëri sekuencimin e pavarur të gjenit. Pra, kjo është me të vërtetë baza dhe ne sigurisht që mund të japim disa shembuj nëse dëshironi.

Dr. Sarah Camargos: Shumë bukur. Sidomos kur lexova punimin tuaj, e gjeta shumë interesante që ju përdorni këto shembuj për të treguar avantazhet e sekuencimit me lexim të gjatë, siç keni përmendur pseudogjenet dhe fazëzimin. A mund të ndani me ne historinë për vëllezërit e motrat dhe binjakët me variante PRKN? 

Dr. Guillaume Cogan: Po. Pra, kolegu ynë nga NIH, Kensuke Daida, fillimisht pati këto dy vëllezër e motra me një fenotip që ishte i pajtueshëm me sëmundjen e Parkinsonit. [00:05:00] Pra, vëllezërit e motrat kishin një fillim të hershëm, një përparim të ngadaltë të sëmundjes dhe mendoj se përdorej sekuencimi i ekzomeve. Pra, sekuencimi i shkurtër.

Ata kishin një variant patogjen me një nukleotid të vetëm, por vetëm një variant, kështu që nuk mjafton për të shpjeguar sëmundjen. Pastaj ata përdorën sekuencimin me lexim të gjatë dhe identifikuan një inversion në alelin e dytë, i cili shpjegon sëmundjen. Dhe inversioni ishte shumë i madh. Është shtatë megabaza.

Pra, kjo shpjegon pse ata nuk e morën të parët. Dhe pastaj nga grupi ynë. Kishim gjithashtu dy vëllezër e motra me formë autosomale recesive të sëmundjes të pajtueshme me PRKN, përsëri, me fenotipin. Dhe ne përdorëm për herë të parë metodat konvencionale të sekuencimit, amplifikimin me sondë të shumëfishtë të ligacionit, sekuencimin e synuar me sekuencimin e ekzomeve.

Dhe patëm një fshirje të ekzomit katër, por vetëm një mutacion përsëri, kështu që kjo nuk ishte e mjaftueshme për të shpjeguar sëmundjen. Ne përdorëm, përsëri, sekuencimin me lexim të gjatë dhe zbuluam se ishte diçka shumë interesante. Pra, në studimin e parë [00:06:00] patëm një fshirje të ekzomit tre dhe ekzomit katër, dhe në të dytin e shtuar patëm një dublikim të ekzomit tre.

Pra, në përgjithësi kemi dy kopje të ekzomit tre, gjë që është normale, apo jo? Shpresoj që të gjithë të kemi dy kopje të ekzomit tre këtu.

Shpresoj dhe kjo është arsyeja pse mjetet e tjera të sekuencimit nuk ishin në gjendje ta shihnin këtë. Dhe vetëm, le të themi se vetëm sekuencimi me lexim të gjatë mund ta identifikonte këtë.

Dhe pastaj Kensuke dhe kolegët e zgjeruan këtë studim, mendoj se ishin 23 individë me një variant PRKN dhe një fillim të hershëm të PD, dhe ata ishin në gjendje të zgjidhnin një të katërtën e rasteve duke përdorur sekuencimin e leximit të gjatë. Pra, kjo është diçka që ka kuptim, mendoj. Dhe neurologët mund ta mendojnë këtë kur kanë një pacient me një mutacion në PRKN dhe një fenotip që është i pajtueshëm.

Dr. Sarah Camargos: Dhe ju u udhëzuat vetëm për fenotipizimin. Kjo është shumë interesante. Pra, ju gërmuat pak vetëm për të parë nëse kishte një variant strukturor që mund të shpjegonte variacionin tjetër in trans [00:07:00].

Është e saktë? 

Dr. Guillaume Cogan: Po.

Dr. Sarah Camargos: E mahnitshme. Përveç zbulimit të gjeneve të reja, një aspekt tjetër interesant për t'u eksploruar është karakterizimi i zgjerimit të përsëritur.

Si është i rëndësishëm ky karakterizim për të kuptuar fenotipin ose këshillimin gjenetik?

Prof. Alexis Brice: Mendoj se ka të paktën dy aspekte për zgjerimet e përsëritura. Së pari, është madhësia dhe madhësia e përshtatshme është shumë e rëndësishme sepse zakonisht ekziston një prag mbi të cilin një përsëritje mund të thuhet se është patogjene. Dhe kjo ndryshon shumë në varësi të çrregullimeve. Dhe për disa prej tyre, duhet të them se pragu mund të jetë i vlefshëm është ende i diskutueshëm, por të paktën mbi një vlerë të caktuar, jeni të sigurt se është patogjene.

Pra, e para është madhësia, e cila është absolutisht [00:08:00] thelbësore për diagnozën. Dhe aspekti i dytë është sekuenca e përsëritjes. Sepse rezulton se në disa lokuse nuk është vetëm madhësia, por edhe përbërja e përsëritjes, e cila është e rëndësishme. Dhe ka përbërje alternative, disa prej të cilave janë patogjene dhe të tjera që tolerohen mirë dhe nuk shoqërohen me sëmundjen.

Me sekuencimin me lexim të gjatë, i merrni të dyja me një gur të vetëm. Keni si madhësinë e përsëritjes ashtu edhe përbërjen, dhe për këtë arsye mund të thoni nëse përsëritja është patogjene apo jo. Dhe kjo është shumë e rëndësishme për shumë nga përsëritjet e identifikuara së fundmi si FGF 14 ose RFC 1 për shembull.

Dr. Guillaume Cogan: Po, ndoshta mund të jap shembuj rreth kësaj. FGF 14 është një shembull shumë i mirë. Pra, është përgjegjës për [00:09:00] ataksi spinocerebellare numër 27 B u identifikua mjaft kohët e fundit dhe ne e dimë që zgjerimet e GAA që janë më të ulëta se 200, ato nuk janë patogjene. Megjithatë, kur përsëritja është mbi 300, ne e dimë se është patogjene dhe përdorim sekuencim të shkurtër leximi sepse madhësia e fragmentit të lexuar është rreth 150.

Nuk mund të dimë asgjë që është më e gjatë. Mund të themi vetëm se ka një zgjerim mbi 150, por nuk mund të themi nëse është mbi 300 apo jo. Pra, nuk mund të themi nëse është patogjene dhe na duhet një teknologji tjetër për ta thënë këtë. Por duke përdorur sekuencimin e leximit të gjatë, mund të tregojmë më saktë madhësinë e zgjerimit dhe mund të themi nëse zgjerimi është mbi pragun apo jo.

Një shembull tjetër i rëndësisë së motivit, pra është një gjen përgjegjës për sindromën e njohur të ataksisë cerebellare, neuropatisë, sindromës së arefleksisë vestibulare, pra CANVAS. Dhe ne e dimë që zgjerimet e gjata të [00:10:00] AAAG, pra janë pesë nukleotide. Ato nuk janë patogjene. Megjithatë, zgjerimet e motivit AAGGG janë patogjene dhe duke përdorur sekuencimin e leximit të gjatë, ne kemi motivin në mënyrë që të dimë nëse është patogjen apo jo.

Dhe mendoj se diçka gjithashtu e rëndësishme është prania ose mungesa e ndërprerjeve. Dhe ne e diskutojmë këtë në punim. Pra, mendoj se një shembull i mirë është ataksia spinocerebelare numër 2. Pra, është një zgjerim i CAG. Dhe nëse në këtë zgjerim të CAG, kemi një ndërprerje ose disa ndërprerje të CAA në vend të CAG, ne e dimë se është përgjegjëse jo për ataksi spinocerebelare, por për sëmundjen e Parkinsonit.

Motivi është prania ose mungesa e integrimit që është e rëndësishme. Për fenotipin, por edhe për moshën e fillimit, depërtimin, trashëgiminë e sëmundjes dhe ashpërsinë dhe llojin e fenotipit. 

Prof. Alexis Brice: Pra, sigurisht që mund të presim që [00:11:00] të identifikojmë më shumë nga këto përsëritje në të ardhmen. Dhe ne e dimë se në çrregullimet neurologjike ato janë veçanërisht të shpeshta.

Pra, mendoj se, duke renditur shumë raste të tjera, me siguri do të zbulojmë mutacione të panjohura në të ardhmen.

Dr. Sarah Camargos: Dhe gjithashtu ishit në gjendje të kontrollonit metilimin. Mund të kuptoni pak më shumë rreth shprehjes së gjenit.

Dr. Guillaume Cogan: Absolutisht duke përdorur metodat kryesore të sekuencimit me lexim të gjatë. Ne mund të identifikojmë metilimin, dhe kjo sigurisht ka disa implikime në sëmundje sepse zakonisht nuk është gjithmonë kështu. Por zakonisht elementët e hipermetiluar në ADN kanë më pak shprehje krahasuar me hipometilimin.

Dhe në kontekstin e çrregullimeve neurodegjenerative. Mendoj se kjo është interesante. Për shembull, nëse kemi gjenin. Sapo e studiuam këtë për NOTCH2NLC, i cili është përgjegjës për kur [00:12:00] keni një zgjerim GGGC në rajonin pesë para materialit. Është përgjegjës për një sëmundje të quajtur Sëmundja e Përfshirjes Hialine Intranukleare Neuronale, dhe ata zbuluan se është shumë interesante, prindërit e paprekur të fëmijëve të prekur nga kjo sëmundje kishin zgjerime më të gjata krahasuar me pasardhësit. Pra, nuk pritet, apo jo? Por duke përdorur ende sekuencimin e leximit të gjatë, ata zbuluan se ky zgjerim i GGC tek prindërit ishte i hipermetiluar. Pra, gjeni ishte më pak i shprehur krahasuar me zgjerimin më të ulët. Dhe ky zgjerim është patogjen sepse po çon në ARN 4 C që çon në një sekuestrim të proteinave që lidhin ARN-në.

Pra, në thelb, nëse keni një shprehje më të ulët, keni më pak ARN 4C dhe atëherë nuk e keni sëmundjen. Është shumë interesante të shihet se metilimi na lejon të kuptojmë pse disa mutacione nuk janë patogjene krahasuar me të tjerat.

Dr. Sarah Camargos: E mrekullueshme. Shumë interesante. [00:13:00] Le të flasim pak për shënjestrimin në sekuencimin e leximit të gjatë. Në prill të vitit 2024, intervistuam Prof. Houlden dhe Dr. Zhongbo Chen duke përdorur sekuencimin e leximit të gjatë të synuar për të përshkruar SCA4. A mund të na kujtoni se si funksionon kjo metodë dhe nëse ka një metodologji tjetër për shënjestrimin në vend të sekuencimit të gjithçkaje?

Dr. Guillaume Cogan: Po. Pra, është një pyetje e mirë sepse mund të përdorni sekuencimin me lexim të gjatë në disa aspekte. Pra, mund të bëni sekuencimin e të gjithë gjenomit, por mund të bëni edhe sekuencimin e synuar. Dhe do të thoja se në punim flasim për tre metoda për ta bërë këtë. Pra, së pari mund të përdorni metodën e bazuar në Cas9.

Pra, thjesht kapni rajonin e interesit duke përdorur CRISPR Cas9, dhe pastaj vetëm renditni këtë rajon të interesit. Pra, ky është i pari. Një tjetër është gjithashtu i thjeshtë. Është PCR me rreze të gjatë. Pra, ju amplifikoni rajonin tuaj të interesit duke përdorur së bashku PCR me rreze të gjatë [00:14:00]. Por sigurisht, nëse e përdorni këtë, mund të keni paragjykim të amplifikimit sepse përdorni një reaksion zinxhir polimeraze, apo jo?

 Pra, kjo është e dyta, dhe e fundit ofrohet vetëm nga Oxford Nanopore Technologies. Pra, e fundit është marrja e mostrave adaptive dhe është mjaft interesante.

Pra, në thelb keni fijen tuaj të ADN-së, e cila po kalon nëpër pore. Dhe pore do të analizojë 100 çiftet e para të bazave. Për shembull, 400 çifte bazash, dhe do të shohë nëse këto çifte bazash janë në rajonin me interes që i keni thënë makinës së sekuencimit ta sekuencojë. Pra, nëse sheh që ky fragment nuk është një fragment me interes, e nxjerr atë.

Pra, do të sekuencojë vetëm përmes fragmenteve të poreve që na interesojnë. Pra, këto janë tre metodat. Bazuar në Cas9, PCR me rreze të gjatë dhe marrja e mostrave adaptive ONT.

Dr. Sarah Camargos: Shumë bukur. Profesor Brice, kam përshtypjen se sekuencimi me lexim të gjatë është pothuajse si versioni gjenetik [00:15:00] i fenotipizimit të thellë, një lloj gjenotipizimi i thellë. A jeni dakord?

Prof. Alexis Brice: Pajtohem plotësisht, me fenotipizimin e thellë, gjen gjëra që nuk i ke parë sepse nuk i ke kërkuar siç duhet. Dhe mendoj se kjo është shumë e rëndësishme që neurologët të jenë në gjendje të kryejnë këtë fenotipizim të thellë, i cili mund të ndihmojë në diagnostikim. Dhe këtu është saktësisht e njëjta gjë sepse mjetet që përdorëm deri në sekuencimin me lexim të gjatë nuk ishin në gjendje të zbulonin disa nga këto variante.

Dhe tani që e kemi këtë mjet, mund t'i dallojmë këto variante dhe mund ta përmirësojmë diagnozën. Pra, është shumë e ngjashme, përveçse kostoja e fenotipizimit të thellë mund të jetë më e vogël se sekuencimi me lexim të gjatë për momentin, të paktën.

Dr. Sarah Camargos: Po. Duke folur për sfidat kur bëhet fjalë për sekuencimin e leximit të gjatë, cilat janë sfidat e mëdha për ne? Përveç kostos.

Dr. Guillaume Cogan: Përtej kostos, sfidat janë së pari, laboratori i lagësht. Pra, protokolli i laboratorit të lagësht nuk është ende i standardizuar. Gjithashtu, tubacioni bioinformatik për të thirrur variancën nuk është i standardizuar. Dhe gjithashtu ju nevojiten shumë kapacitete ruajtjeje të të dhënave sepse gjeneron qindra gigabaza.

Pra, ju nevojiten kapacitete të mira ruajtjeje. Gjithashtu, GPU-të dhe CPU-të e mira për të thirrur variancën është shumë intensive në llogaritje dhe në fund të zinxhirit, le të themi për të interpretuar variancën, është gjithashtu më e vështirë sepse kemi shumë më tepër variancë. Të paktën ne jemi të sigurt në variancën tonë sepse, për shembull, nëse bëni sekuencim të leximit të shkurtër, përpiqeni të analizoni variancën strukturore, e dini që shumë prej tyre janë thjesht pozitive të rreme. Por duke përdorur sekuencim të leximit të gjatë, e dini që shumica e tyre janë pozitive të vërteta. Sidoqoftë, kur analizojmë variancën, nëse doni të identifikoni shkakun e sëmundjes së një pacienti, doni të hiqni variancat që kanë frekuencë të lartë [00:17:00] që janë të zakonshme, në të gjithë ne vetëm për të zgjedhur variante.

Problemi është se për sekuencimin e gjatë, nuk kemi katalogë si Genome 80 për sekuencimin e leximit të shkurtër. Pra, është e vështirë të filtrohet varianca e leximit të shkurtër. Megjithatë, ka disa projekte bashkëpunuese, për shembull, projekti 1000 Genome që po sekuencon qindra, nëse jo mijëra kontrolle të shëndetshme, për të na ofruar baza të dhënash të popullsisë, duke na lejuar të paraqesim variancën sipas frekuencës.

Dhe, së fundmi, duke pasur pak përvojë me të, ndonjëherë është frustruese sepse mendon sikur, unë i rendit të gjitha llojet e variancave që kam si SND të variancave strukturore, përsëritje të shkurtra leximi, por nuk e gjej mutacionin gjenetik. Por e di që është diku këtu, por mund të marr vetëm një shembull.

Për shembull, kemi variante strukturore intronike që mund të ndikojnë në bashkimin e një gjeni, por nuk kemi ndonjë mjet për të parashikuar nëse po ndikon në bashkim apo jo. Pra, shpresojmë që në të ardhmen bioinformatikët [00:18:00] do të zhvillojnë këto mjete në mënyrë që të mund të identifikojmë më në fund shkakun e sëmundjes së të gjithë njerëzve me një çrregullim gjenetik, le të themi.

Dr. Sarah Camargos: Ose madje sekuencoi të gjithë ARN-në gjithashtu.

Dr. Brice ose Cogan: Po, kjo është një tjetër. Duke përdorur sekuencim të gjatë. Po, ne mund të identifikojmë izoforma të reja siç flasim në punim.

Dr. Sarah Camargos: Gjithashtu, në punimin tuaj keni shqyrtuar mundësitë e hartëzimit optik të gjenomit. Na shpjegoni se si funksionon kjo teknikë dhe cilat janë avantazhet kryesore.

Dr. Guillaume Cogan: Pra, është mjaft e ndryshme në krahasim me sekuencimin me lexim të gjatë sepse nuk është një sekuencim. Pra, në thelb ju thjesht etiketoni ADN-në tuaj në një sekuencë kanonike, sekuenca të shkurtra, dhe pastaj keni një mikroskop që shikon distancën midis etiketës suaj të etiketuar të ADN-së. Pra, me këtë mund të identifikoni variantet strukturore që janë mbi 500 çifte bazash.

Pra, nuk mund të shihni asgjë më poshtë se kjo. Kjo është një gjë. Ju [00:19:00] nuk mund të shihni as SND-të, variant me një nukleotid të vetëm duke përdorur hartëzimin optik të gjenomit. Megjithatë, është mjaft interesante sepse thellësia, mbulimi është më i mirë krahasuar me sekuencimin me lexim të gjatë. Mund të merrni thellësi mbulimi prej 150 duke përdorur OGM krahasuar me zakonisht 20 deri në 30 herë me sekuencimin me lexim të gjatë.

Dhe, dhe po, kjo është gjëja kryesore e OGM-së, do të thoja. Disa njerëz e krahasuan OGM-në dhe sekuencimin me lexim të gjatë. Dhe për sekuencimin me lexim të gjatë, është e vështirë të identifikohen variantet, variantet strukturore që janë mbi 50 kb. Megjithatë, OGM është i mirë për të identifikuar këto lloj mutacionesh. Pra, do të thoja se nëse keni para, mund t'i përdorni të dyja dhe kjo do të ishte më e mira.

Por ju duhen para për të bërë 

Dr. Sarah Camargos: Sigurisht.

Prof. Alexis Brice: Jo, dua të them, ju nevojitet edhe ADN me peshë të lartë molekulare dhe kjo ndonjëherë është një kufizim për këto teknika. Dhe biobankimi klasik ndonjëherë përdor teknika nxjerrjeje [00:20:00] që nuk ofrojnë një ADN të tillë. Pra, është diçka që duhet ta merrni parasysh të paktën për grupet ose mostrat e ardhshme që po merrni.

Dr. Guillaume Cogan: Po. Dhe diçka tjetër për OGM-në, mendoj se një kufizim i OGM-së që është mirë ta dinë dëgjuesit është se është shumë e vështirë të gjesh vendndodhjen e saktë të pikave të thyerjes duke përdorur OGM-në. Zakonisht nuk mund ta gjesh. Është midis 6 KB dhe 15 kb. Pra, mund të jetë e rëndësishme në gjenetikën mjekësore sepse duke përdorur OGM-në, mund të thuash që një variant strukturor përfshin një ekzomë, ndërsa nuk është kështu, kështu që nuk është një pozitiv i rremë, por thjesht nuk është aq i saktë për variancën strukturore sa sekuencimi me lexim të gjatë.

Pra, përsëri, është mirë t'i përdorni të dyja nëse doni të përdorni OGM, po.

Dr. Sarah Camargos: Pra, ju parashikoni që këto dy teknologji do të bëhen ose do të bëhen qasja e vitit të parë për të diagnostikuar çrregullimet neurogjenerative trashëgimore në të ardhmen? 

Prof. Alexis Brice: Me kusht që paratë [00:21:00] të jenë aty për t'i paguar ato. Po, mendoj se ato qartësisht lejojnë zgjidhjen e një pjese më të madhe të rasteve dhe për këtë arsye janë shumë të dobishme. Mendoj se nëse duam të kemi një qasje, një qasje e nivelit të parë dhe të fundit ku një teknologji e vetme mund të ofrojë rezultatet.

Dr. Guillaume Cogan: Po, do të thoja se ka ende shumë punë për të bërë që këto teknologji të jenë të parat këtu. Po.

Dr. Sarah Camargos: Po. Shumë bukur. Para se të mbarojmë, a ka ndonjë mesazh kyç që të dy do të donit që dëgjuesit tanë ta nxjerrin nga ky dokument?

Dr. Guillaume Cogan: Po. Pra, mendoj se duhet ta njihni projektin tuaj dhe realisht se çfarë doni të shihni përpara se të përdorni këto teknologji. Dhe mendoj se në artikullin tonë, u përpoqëm të jepnim shembuj në mënyrë që lexuesi të kuptojë se çfarë mund të përfitojë nga këto teknologji. Dhe mendoj se po, leximi i këtij artikulli është një mënyrë për ta kuptuar më mirë këtë dhe për ta përdorur atë në një mënyrë të përshtatshme për secilin projekt. Po.

Dr. Sarah Camargos: Po. Pra, mjekë, ju falënderojmë shumë që na u bashkuat. Dhe që ndani mendimet tuaja sot. Faleminderit të gjithë dëgjuesve tanë që ishin me ne në Podkastin MDS. Qëndroni të sintonizuar për episodin tonë të radhës, dhe deri atëherë kujdesuni për veten dhe mirupafshim.

Dr. Guillaume Cogan: Faleminderit që na keni.